【为什么小鼠不会感染乙肝病毒❓】#bioart每日一问# #乙肝#
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）属于嗜肝DNA病毒，主要感染人的肝细胞，其慢性感染可显著提高肝硬化和肝癌的发病率。

针对慢性乙肝，目前临床上主要有干扰素α和核苷类似物两类药物。这些药物虽然可以有效抑制HBV的复制并减缓疾病进程，但不能彻底治愈慢性乙型肝炎，主要原因是现有药物无法清除HBV感染细胞后形成的微染色体cccDNA。由于缺少简便易操作的动物感染模型，HBV相关机制研究和药物研发受到了很大的阻碍。

早期研究显示小鼠作为最常用的小型实验动物并不支持HBV感染。将HBV受体人源牛磺胆酸钠共转移多肽（hNTCP）在小鼠肝细胞中表达可以支持HBV感染进入小鼠肝细胞，但仍不能成功建立HBV感染。为探究HBV在小鼠肝细胞中具体的受限制步骤，研究人员构建了hNTCP的转基因小鼠及稳定表达hNTCP的小鼠肝癌细胞系Hepa1-6-hNTCP，可以支持HBV感染的人肝癌细胞系Huh7-hNTCP作为阳性对照。

通过HBV/HDV（hepatitis delta virus，丁型肝炎病毒，HBV的卫星病毒，利用hNTCP感染肝细胞）感染及转染体外合成的pgRNA，首先证实了HBV可以利用hNTCP感染进入小鼠肝细胞，但不能形成cccDNA。同时，研究人员利用体外合成的cccDNA分子、工程菌中合成的重组cccDNA分子及HBV复制型质粒证实了HBV的转录可以在小鼠肝细胞中正常进行。研究人员在体外合成了rcDNA的不同修复中间体分子及从HBV病毒颗粒中抽提病毒来源的rcDNA分子，利用了rcDNA的体外修复体系及小鼠高压尾静脉注射模型，结果表明小鼠肝细胞可以支持rcDNA修复形成cccDNA。RcDNA修复形成cccDNA的场所是细胞核，因此研究人员利用核酸原位杂交技术探究小鼠细胞中rcDNA的入核过程是否受限，结果显示HBV基因组rcDNA可以被转运至小鼠肝细胞的细胞核。小鼠肝细胞支持HBV基因组rcDNA的核转运及rcDNA分子修复形成cccDNA，这也提示HBV核衣壳的解离可能受到了限制。

进一步通过核酸酶敏感实验对HBV核衣壳完整性进行分析发现，小鼠肝细胞中无论是细胞质还是细胞核PF-rcDNA的核酸酶敏感性与人肝癌细胞系Huh7-hNTCP类似：绝大部分的细胞质及细胞核PF-rcDNA对核酸酶DNaseI处理敏感，少量PF-rcDNA耐受DNaseI的处理； Hepa1-6-hNTCP细胞质中蛋白结合的rcDNA（protein-linked rcDNA，P-rcDNA，主要指HBV聚合酶蛋白Pol共价结合的rcDNA）表现出对DNaseI处理完全的耐受性，表明小鼠肝细胞质中的核衣壳解离受到限制。

综上所述，本研究进一步揭示了小鼠肝细胞除了缺少病毒进入受体之外，在其细胞质中病毒核衣壳无法解离是限制HBV感染的一个重要原因。